臨床生物化學(xué)/主要實驗參數(shù)的選擇（設(shè)置）
| 醫(yī)學(xué)電子書 >> 《臨床生物化學(xué)》 >> 臨床生物化學(xué)分析儀的性能與應(yīng)用 >> 臨床生化自動分析的方法 >> 主要實驗參數(shù)的選擇（設(shè)置） |
| 臨床生物化學(xué) |
|
|
|
一般自動分析儀有12個主要數(shù)據(jù)，即波長、溫度、標(biāo)本及試劑量、空白時間（Tb）、開始收集實驗數(shù)據(jù)時間（Ti）、實驗數(shù)據(jù)收集窗時間（TW）、實驗數(shù)據(jù)收集完成時間（Td）和最后時間（Tf）、速率時間（Tr）、線性限度（L）、異常吸收率（ABN）、曲線擬合、濃度因素（F）。這些參數(shù)都是通過方法學(xué)的研究之后，根據(jù)反應(yīng)的具體情況加以確定的。
（一）波長
根據(jù)分光亮度計的光吸收曲線或者一個比色杯不同波長的反應(yīng)曲線選擇分析波長和空白波長。對快速反應(yīng)，以光吸收曲線的低凹區(qū)波長為空白波長，光吸收曲線中吸亮度最大而較平坦區(qū)的波長為分析波長。
（二）溫度
一般均選用30℃。
（三）樣品量及試劑量
可根據(jù)手工法按比例縮減或者重新設(shè)計。要考慮到檢測靈敏度、線性范圍，盡可能將樣品稀釋倍數(shù)大些，以降低樣品中其它成分的影響。
（四）分析時間的確定
用高、中、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進行實驗用研究模式，進行酶促反應(yīng)時間曲線或反應(yīng)速度時間曲線的觀察，根據(jù)吸收率動態(tài)變化的具體數(shù)據(jù)，確定有關(guān)的分析時間。
⒈Tb 終點法，吸光度上升型，一般選擇反應(yīng)尚示開始而試劑和樣品已充分混合均勻，一般定為4秒。動態(tài)法的Tb＝Ti。
⒉Ti 終點法選擇反應(yīng)接近平衡期，動態(tài)法則選擇接近進入線性期。這個參數(shù)不很嚴格。如果Ti定的太早，過多的不符合要求的數(shù)據(jù)點將舍棄。Ti定的太晚，數(shù)據(jù)收集時間就要延長，在動態(tài)法還可能使底物耗盡的發(fā)生機會增多。在終點法Ti大致定于Tf的70％或接近于反應(yīng)完全時，動態(tài)法確定Ti時，主要考慮避開酶反應(yīng)的延遲期以及試劑和樣品混合后溫度不平衡期。
⒊TW 根據(jù)高、中、低濃度標(biāo)準(zhǔn)液反應(yīng)速度時間曲線加以確定。要求各標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度變化在該時間內(nèi)均在線性判斷標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。終點法一般為4-10秒。在動態(tài)法中，為了使反應(yīng)不出現(xiàn)未反應(yīng)（NR）的標(biāo)志，在Tb與Tf之間至少有8mA的吸收率變化。在快速反應(yīng)時，TW從30秒開始，按10秒向上遞增。在慢反應(yīng)可達120秒。TW不應(yīng)太長，否則可以偏離線性，也減低工作效率。
⒋Tr Tr值的大小對方法的精密度有較顯著的影響。為了保證方法的精密度，使△A＞1.0mA是必要的。如Tr時間短，△A太小，測定方法的精密度就降低。一般情況下，Tr定為20-60秒。在現(xiàn)有程序中，是以正常低值標(biāo)本的△A＞1mA來決定Tr值。如ALT測定，正常低值為7u/L，Tr＝7u/L/2.57＝2.7mA/60秒，30秒＝1.35mA，故選30秒為Tr時間。
（五）線性判斷標(biāo)準(zhǔn)（線性限L）
指在數(shù)據(jù)收集窗時間內(nèi)吸收率變化的允許范圍。作為終點法，從理論上講，化學(xué)反應(yīng)達到平衡（終點），吸光度應(yīng)該穩(wěn)定不變，也就是說，在TW內(nèi)吸收率變化應(yīng)該是零，即線性判斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該定為零。在實際中，由于信號有一定的飄移，更主要是測定要求快速，是在反應(yīng)還沒真正到達終點時進行測定，加上自動分析儀檢測的靈敏度大多較高，精度可達到0.1mA，所以在TW期間的吸收率會有一定的波動。不同的化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)，吸光度變化程度不一。要根據(jù)實驗結(jié)果選擇一個適當(dāng)?shù)奈舛茸兓秶鳛榫€性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以此來判定反應(yīng)是否達到了平衡。這個標(biāo)準(zhǔn)值如果定的太小，反應(yīng)也很難達到要求的標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)非線性的機會太多，或者要延長觀測時間，降低工作效率，這就不符合快速分析的要求。相反，這個線性判斷標(biāo)準(zhǔn)定的太大，就失去了判斷線性的意義，出現(xiàn)反應(yīng)根本沒有達到終點就錯誤地判為達到標(biāo)準(zhǔn)，影響測定結(jié)果的可靠性。在終點法中，L單位是mA/2秒，大多選用1.0mA/2秒。如出現(xiàn)反應(yīng)不完全，可按0.5mA順序增加。在動態(tài)法中，L單位是mA/秒，一般從0.1mA/秒開始，如果試驗結(jié)果出現(xiàn)非線性（NL）情況多，可以增大，按0.01mA遞增，但不可超過0.1mA。
（六）異常吸收率限度
這一參數(shù)主要根據(jù)每個法實驗測定的線性范圍來確定。即用吸光率作為縱軸，標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。這個線性段向非線性段轉(zhuǎn)折拐點的相應(yīng)吸收率值即為異常吸收率限度。終點法吸收率超過此值被標(biāo)志為超出限度（XL）。在動態(tài)法中，試劑空白的吸收率超過ABN，ABN被標(biāo)志為試劑吸收率異常（AB），測定杯的吸收率超過ABN時，ABN被標(biāo)志為底物耗盡（EX）。
 分析方法的分類 | 儀器室條件及儀器操作  |
| 關(guān)于“臨床生物化學(xué)/主要實驗參數(shù)的選擇（設(shè)置）”的留言： |  訂閱討論RSS
|
|
目前暫無留言 | |
| 添加留言 | |