醫學免疫學/檢測的原理

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醫學免疫學

免疫學檢測法
- 抗原或抗體的檢測
  - 檢測的原理
  - 抗原或抗體檢測的實用意義
  - 抗原或抗體檢測的方法
  - 用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應

借助抗原和抗體在體外特異結合后出現的各種現象，對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量、定位的檢測。

1．抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結合就像酶與底物的結合，激素與其受體的結合一樣不是化學的反應，而是非共價鍵的可逆的結合。抗原決定簇和抗體分子可變區互補構型，造成兩分子間有較強的親和力。空間構型互補程度不同，抗原和抗體分子之間結合力強弱也不同。互補程度高，則親和力強。此外，反應溫度、酸堿度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結合力大小可用親合力來表示。高親合力的抗體與抗原的結合力強，即使抗原濃度很低時也有較多的抗體結合抗原形成免疫復合物。

2．抗原或抗體外檢測原理根據抗原抗體結合形成免疫復合物的性狀與活性特點，對標本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。定性和定位檢測比較簡單，即用已知的抗體和待檢樣品混合，經過一段時間，若有免疫復合物形成的現象發生，就說明待檢樣品中有相應的抗原存在。若無預期的現象發生，則說明樣品中無相應的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應抗體。

對抗原或抗體進行定量檢測時，以反應中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復物的濃度呈函數關系。

（1）根據免疫復合物產生的多少來推算樣品中抗原（或抗體）的含量：在一定的反應條件下，加入的已知抗體（或抗原）的濃度一定，反應產生的免疫復合物多少與待檢樣品中含有相應抗原（或抗體）量成正比。也就是抗體濃度一定時，免疫復合物越多則樣品中的抗原量也越多。可用實驗性標準曲線推算出樣品中抗原（或抗體）的含量。如免疫單向擴散試驗、免疫比濁試驗和酶聯免疫檢測等都屬于這類方法。

（2）抗原或抗體效價滴定的原理：當抗原抗體復合物形成多少不能反應抗原抗體反應強弱時，就不能以檢測反應強度來對抗原或抗體進行定量。在實際工作中，把濃度低的反應成分（抗原或抗體）的濃度固定，把濃度高的另一種反應成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比較3只家兔產生抗體的多少，即滴定3只兔血清抗體效價，可用雙向瓊脂擴散法來滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現明顯沉淀淺的抗原稀釋度（如甲兔的抗體效價為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產生抗體的效價要高）。也就是表示效價的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多。因人血清（抗原）和抗體（免疫兔血清）相比，濃度高，故應稀釋抗原。