醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)/限制性片段長度多態(tài)性
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一個人的兩套單倍體DNA是不完全相同的，一般每100－500個堿基對就有一個是不相同的。換言之，如果把兩套基因組DNA（各3.2×109bp）排列起來，那么平均有1000萬處不同，它們多位于內(nèi)含子序列中。實際上，除單卵雙生子外，人群中沒有兩個個體的基因組DNA是完全相同的。
DNA的多態(tài)性雖可通過DNA測序檢出，但用限制酶消化卻是最常用的檢測方法。
1．RFLP由于堿基的變異可能導(dǎo)致酶切點的消失或新的切點出現(xiàn)，從而引起不同個體在用同一限制酶切時，DNA片段長度出現(xiàn)差異（圖13-3），這種由于內(nèi)切酶切點變化所導(dǎo)致的DNA片段長度的差異，稱為限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragmentlength polymporphism, RFLP）。RFLP反映了常見的個體間DNA核苷酸的可遺傳性變異，它按照孟德爾方式遺傳。RFLP可用Southern印跡雜交法（見下節(jié)）檢出。用Southern雜交檢出RFLP時，如探針跨越切點，則被切開的兩個片段均可與探針雜交，從而顯示兩條雜交帶（圖13-4）。
圖13-3 RFLP示意圖箭頭酶切位點；
左圖：等位基因2由于出現(xiàn)新的切點，DNA片段縮至8kb;
右圖：DNA片段電泳后雜交圖
13-4 RFLP的檢出等位基因1因有額外切點而導(dǎo)致產(chǎn)生
兩個長短不同的DNA片段（3kb及5kb）且均能與探針雜交
2．兩點RFLP
（1）點態(tài)（point polymorphism）：是由于單個或少數(shù)堿基的改變引起酶切點的出現(xiàn)或消失所致的RFLP。上述的RFLP即屬于這一類。它們屬經(jīng)典的RFLP。在人類基因組中已發(fā)現(xiàn)數(shù)以百計的此類多態(tài)位點。
（2）數(shù)目變異的串連重復(fù)（variable number tandem repeats,VNTR）：上述經(jīng)典的單個堿基取代所致的RFLP一般只能檢測到一種雜合性的兩種形式，即“有”或“無”某個限制酶切位點，而且每個位點在人群中的雜合子頻率通常不會超過50％，當(dāng)被測個體為純合狀態(tài)時，利用RFLP就無法得到所需要的多態(tài)信息。此外，在整個基因組中，這類RFLP目前發(fā)現(xiàn)的數(shù)量還有限，并分布不勻。
但是，在人類基因組中還存在一類DNA重復(fù)序列，稱為小衛(wèi)星DNA。它們分布十分廣泛，每一個單位通常只有16-28bp長，但其重復(fù)次數(shù)在人群中是高度變異的。當(dāng)用限制酶切割VNTR區(qū)時，只要酶切點不在重復(fù)區(qū)內(nèi)，就可能得到各種長度不同的片段（圖13-5）
與小衛(wèi)星DNA不同，另一類重復(fù)序列是衛(wèi)星DNA。它們的基本序列有1－6bp，如（TA）n、(CGG)n等，通常重復(fù)10-60次并呈高度的多態(tài)性。
圖13-5 VNTR導(dǎo)致的RFLP重復(fù)次數(shù)的變異致酶切位點的移動和DNA片段長度的變異
VNTR具有高度的變異性，同時也是按照孟德爾方式遺傳的，因此是很好的遺傳標(biāo)記，由于它們類型眾多和在基因組中分布廣泛，因而在基因連鎖診斷中應(yīng)用日益廣泛。
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