A+醫(yī)學(xué)百科 >> 懸浮培養(yǎng)

suspension culture

非貼壁依賴性細(xì)胞的一種培養(yǎng)方式。

細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)基中生長或維持。某些貼壁依賴性細(xì)胞經(jīng)過適應(yīng)和選擇也可用此方法培養(yǎng)。增加懸浮培養(yǎng)規(guī)模相對比較簡單，只要增加體積就可以子。深度超過5mm，需要攪動培養(yǎng)基，超過10cm，還需要深層通入CO2和空氣，以保證足夠的氣體交換。

通過振蕩或轉(zhuǎn)動裝置使細(xì)胞始終處于分散懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)的培養(yǎng)方法。

利用固體瓊脂培養(yǎng)基對植物的離體組織進(jìn)行培養(yǎng)的方法在植物遺傳實驗中已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。但這種方法在某些方面還存在一些缺點，比如在培養(yǎng)過程中，植物的愈傷組織在生長過程中的營養(yǎng)成分、植物組織產(chǎn)生的代謝物質(zhì)呈現(xiàn)一個梯度分布，而且瓊脂本身也有一些不明的物質(zhì)成分可能對培養(yǎng)物產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致植物組織生長發(fā)育過程中代謝的改變而利用液體培養(yǎng)基則可以克服這一缺點，當(dāng)植物的組織在液體培養(yǎng)基中生長時，我們可以通過薄層震蕩培養(yǎng)或向培養(yǎng)基中通氣用以改善培養(yǎng)基中氧氣的供應(yīng)。植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)是指將植物細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中能夠保持良好的分散狀態(tài)。這些小的細(xì)胞聚合體通常來自植物的愈傷組織。

一般的操作過程是把未分化的愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行旋轉(zhuǎn)震蕩，一般可用100～120 r/min 的速度進(jìn)行。由于液體培養(yǎng)基的旋轉(zhuǎn)和震蕩，使得愈傷組織上分裂的細(xì)胞不斷游離下來。在液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物是混雜的，既有游離的單個細(xì)胞，也有較大的細(xì)胞團(tuán)塊，還有接種物的死細(xì)胞殘渣。

在液體懸浮培養(yǎng)過程中應(yīng)注意及時進(jìn)行細(xì)胞繼代培養(yǎng)，因為當(dāng)培養(yǎng)物生長到一定時期將進(jìn)入分裂的靜止期。對于多數(shù)懸浮培養(yǎng)物來說，細(xì)胞在培養(yǎng)到第18～25d 時達(dá)到最大的密度，此時應(yīng)進(jìn)行第一次繼代培養(yǎng)。在繼代培養(yǎng)時，應(yīng)將較大的細(xì)胞團(tuán)塊和接種物殘渣除去。若從植物器官或組織開始建立細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系，就包括愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、單細(xì)胞分離和懸浮培養(yǎng)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞的形態(tài)、生理、遺傳、凋亡等研究工作，特別是為基因工程在植物細(xì)胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。經(jīng)過轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞再經(jīng)過誘導(dǎo)分化形成植株，即可獲得攜帶有目標(biāo)基因的個體。

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