熒光素
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熒光素是具有光致熒光特性的染料，熒光染料種類(lèi)很多
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種類(lèi)
目前常用于標(biāo)記抗體的熒光素有以下幾種。
異硫氰酸熒光素
(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構(gòu)體，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性與蛋白質(zhì)結(jié)合力等方面都更優(yōu)良。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。
四乙基羅丹明
(rhodamine, RB200) RB200為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。最大吸收光波長(zhǎng)為 570nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為595～600nm，呈現(xiàn)橘紅色熒光。
四甲基異硫氰酸羅丹明
(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC為羅丹明的衍生物，呈紫紅色粉末，較穩(wěn)定。最大吸收光波長(zhǎng)為 550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈現(xiàn)橙紅色熒光，與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ?a href="/w/%E6%9F%93%E8%89%B2" title="染色">染色。因其熒光淬滅慢，也可用于單獨(dú)標(biāo)記染色。
酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)
某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如，4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性磷酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基苯乙酸等。 5．鑭系螯合物 某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪 (Eu3+)、鋱 (Tb3+) 等的螯合物可發(fā)射特征性的熒光，而且激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬、發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄、熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，最適合于時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定。
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