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基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)/羊水標(biāo)本的采集

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臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)

臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)目錄

胎兒成熟度的監(jiān)測(cè)是決定高危妊娠選擇合理的分婚時(shí)間和處理方針的重要依據(jù),主要是通過(guò)羊水中某物質(zhì)的消長(zhǎng)來(lái)觀察胎兒的器官功能是否發(fā)育完善。

一、胎兒肺成熟度檢查

胎兒肺成熟的檢查對(duì)判定新生兒的特發(fā)性呼吸窘迫綜合征(idiopathic respiratory distress syndrone,IRDS),亦即新生兒肺透明膜病極有意義。此種情況主要見(jiàn)于妊娠37周前分婚的早產(chǎn)兒病死率為50%-70%,此病也可見(jiàn)于剖宮產(chǎn)兒及產(chǎn)母有糖尿病可妊高征的初生兒。RDS占所有新生兒死亡病例為19.5%。患RDS的新生兒被癥實(shí)為因肺泡表面活性物質(zhì),主在是卵磷脂缺乏。因此使肺泡表面張力增加和穩(wěn)定性喪失而導(dǎo)致呼氣末肺泡萎陷,進(jìn)行性倆肺膨脹不全。機(jī)體缺氧,肺泡上皮細(xì)胞破壞,通透明性增加,含纖維蛋白原,的液體不滲入肺泡壁形成透明膜,阻礙換氣而死亡。

常用的檢測(cè)方法有羊水泡沫振蕩試驗(yàn)、羊水吸光度測(cè)定,薄層包譜法卵磷脂和鞘磷脂比值測(cè)定,酶法卵磷脂定量以及營(yíng)業(yè)熒光偏振測(cè)定。

1.羊水泡沫試驗(yàn):羊水中的一些物質(zhì)可減低水的表面張力,經(jīng)振蕩后,在所液界面可形成穩(wěn)定的泡沫。在抗泡沫劑乙醇的存在下,蛋白質(zhì)膽鹽游離脂肪酸和不飽和磷脂等形成的泡沫在幾鈔鐘內(nèi)即使迅速破壞消除。而羊水中的肺泡表面活性物質(zhì)和磷脂是即親水又親脂的兩性界面物質(zhì),它甩形成的泡沫在室瘟下可保持?jǐn)?shù)小時(shí),故經(jīng)振蕩后可在報(bào)導(dǎo)液界成出現(xiàn)環(huán)繞試管邊緣的穩(wěn)定泡沫層。該試驗(yàn)是最常用的床邊試驗(yàn),一般取試管2支。第一管羊水與95%乙醇之比為1:1,第二管比例為1:2。經(jīng)強(qiáng)力振蕩15-20秒后,靜置15分鐘后觀察,如第二管表面遙存在完整泡沫環(huán),則L/S比值大于等于2,提示胎兒成熟,如僅第一管表面存在完整泡沫環(huán),則L/S比值可能<2;如兩管均不見(jiàn)泡沫環(huán),則提示胎我不成熟。進(jìn)一步精確的羊水泡沫試驗(yàn)還可以將羊水與95%乙醇進(jìn)行一系列的稀釋試驗(yàn)。

2.羊水吸光度測(cè)定:羊水吸光度測(cè)定是以羊水中磷脂類物質(zhì)的含量與其濁度之間的關(guān)系為基礎(chǔ)的。當(dāng)波長(zhǎng)為650nm時(shí),羊水中磷脂類物質(zhì)越多,A650越大,胎兒的成熟度越好。測(cè)定時(shí)以蒸餾水調(diào)零,光徑1cm,波長(zhǎng)650nm,讀取A值,有文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為A650大于等于0.075為陽(yáng)性,表示胎兒成熟。如A650小于等于0.050為陰性,表示胎兒不成熟。

3.薄層層析色譜測(cè)定卵磷脂/鞘磷脂比值在妊娠早期羊水中卵磷脂濃度很低,35書(shū)刊號(hào)后突然升高,而鞘磷脂在妊娠32-40周較穩(wěn)定,因此L和S在組成上的變化可以蝗顯反映也胎兒肺的成熟度,TLC法有較高的準(zhǔn)確性,原量是用有機(jī)溶劑氯仿抽提羊水中的磷脂,將標(biāo)本與L/S標(biāo)準(zhǔn)品置由硅膠G或H鋪成的TLC板上展開(kāi),可選擇不同的染色劑職鉬藍(lán)、羅丹明B硝酸氧鉍、磷鉬酸、甩化亞錫或飽和碘蒸氣等,著色后依層快慢標(biāo)準(zhǔn)品吸顯示磷肥酰甘油、磷肥酰絲氨酸磷脂酰乙醇胺磷脂酰肌醇、卵磷脂、和鞘磷脂的位置,將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,測(cè)量樣品L和S色譜斑面積或用光密度計(jì)掃描求得L/S比值。以L/S>2.0作為判定胎兒肺成熟的閾值。以此值預(yù)測(cè)IRDS的靈敏度為84%,非IRDS的了病率卻高于正常孕婦的新生兒,這點(diǎn)不應(yīng)忽視。近年來(lái)關(guān)于IRDS研究及其方法學(xué)進(jìn)展很快,除上述方法外,還可用酶法直接測(cè)定卵磷肥和磷肥酰甘油,如卵磷脂<40mg/L則說(shuō)明胎兒不成熟,羊水中如檢出磷脂酰甘油,即使L/S<2.0新生兒也不會(huì)出現(xiàn)IRDS,熒光偏振微粘度測(cè)量是根據(jù)較高的表面活性物質(zhì)可產(chǎn)生較低的偏振值,F(xiàn)P與創(chuàng)刊齡呈負(fù)相關(guān)的原理,以嚳偏振為單位,將凈偏振300mpol定為醫(yī)學(xué)決定水平,來(lái)判定IRDS。其靈敏度為87%,特異性為92%。

二、胎兒腎成熟度檢查

1.肌酐測(cè)定:羊水中的肌酐來(lái)?yè)淇颂耗颍瑸樘?a href="/w/%E4%BB%A3%E8%B0%A2" title="代謝">代謝產(chǎn)物,其排泄量反映腎小球的成熟度。雖然肌酐在反映胎兒成熟度方面是一個(gè)可靠的化學(xué)指標(biāo),但其濃度受幾種因素干擾,因此在解稀和判斷抬兒成熟度時(shí)應(yīng)注意:①羊水中肌酐濃度受羊水量和胎兒肌肉發(fā)育程度和影響;②孕婦血漿肌酐濃度會(huì)影響羊水肌酐濃度。羊水肌酐范圍較寬,為159.1-353.6μmol/L,一般高于血漿值。肌酐濃度大于等于176.8μmol/L提示胎兒成熟,132.6-175.9μmol/L為可疑,小于等于131.7μmol/L為不成熟。

2.葡萄糖測(cè)定:羊水葡萄糖主要來(lái)自母體,部分來(lái)自胎兒尿。妊娠23周前隨羊膜面積擴(kuò)大,羊水理增加,AFG逐漸增加,至24周達(dá)高峰2.29mmol/L左右,以后隨胎兒腎成熟,腎小管對(duì)葡萄糖重吸收增強(qiáng),胎尿排糖量減少,加上胎兒盤(pán)通透明性隨胎齡增加嘏降低,AFG便逐漸減低,臨產(chǎn)時(shí)可降到0.40mmol/L以下。AFG<0.56mmol/L,提示胎兒腎發(fā)育成熟;AFG>0.80mmol/L為不成熟。

三、胎兒肝成熟度檢查

羊水中的膽紅不比物質(zhì)隨著胎兒肝臟酶系統(tǒng)逐漸完善而減少,因此羊水中膽紅素濃度可作為判斷胎兒肝成熟的一個(gè)指標(biāo)。根據(jù)膽紅素中450nm 有吸收峰的特點(diǎn),取5-10毫升羊水以濾紙去除上皮細(xì)胞與胎脂,以蒸餾水調(diào)零,光徑1.0cm,波長(zhǎng)450nm讀取吸收光度。A450<0.02提示胎兒肝成熟;0.02-0.04為可疑,>0.04為未成熟。此外該項(xiàng)檢測(cè)還可協(xié)助診斷胎兒溶血及估計(jì)溶血的進(jìn)展情況,為胎兒出生前后的臨床處置之不理提供依據(jù)。如果孕婦本人有某種原因的溶血性貧血或嚴(yán)重肝功能不良的時(shí),也會(huì)致羊水的膽紅素升高,應(yīng)予以注意。羊水膽紅素定量應(yīng)<0.43μmol/L。

四、胎兒皮脂腺成熟度檢查

羊水中和脂肪細(xì)胞為從胎兒皮脂腺及汗腺脫落的細(xì)胞,晚期妊娠時(shí),羊水中脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率隨胎齡增加而增高,可作為胎兒皮膚成熟的指標(biāo)。將羊水的離心沉淀物滴于載玻片上,加1.36mmol/L硫酸尼羅藍(lán)水溶液1滴混勻,1-2min后加蓋片,于炎焰上 50-60攝氏度緩緩加熱2-3min,置顯微鏡下觀察,脂肪細(xì)胞無(wú)核,染色楊橘黃煞費(fèi)苦心,其它細(xì)胞染色成藍(lán)煞費(fèi)苦心,計(jì)數(shù)200-500個(gè)細(xì)胞,計(jì)算脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率。如出現(xiàn)率>20%為成熟,10-20%為可疑,<10%為未成熟,但大于等于50%.為過(guò)熟。

五、胎兒唾液腺成熟度檢查

羊水中淀粉酶來(lái)自胎兒胰腺及唾液腺。胰腺型同工酶自始致終變化不大,唾液腺型同工酶自妊娠28周左右開(kāi)始增加較快,顯示胎兒唾液腺有公泌功能,妊娠36周后其活性顯著上升,因此測(cè)定羊水中淀粉酶含量,可作為判斷胎兒成熟度一個(gè)指標(biāo),胎齡>38>周,若酶活性> 120蘇氏單位為成熟兒,否則為未成熟兒。

肌酐、葡萄糖、膽紅素和淀粉酶測(cè)定方法詳見(jiàn)“臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)”。

32 羊水的生理和病理 | 胎兒成熟度檢查 32
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