組織學/細胞和細胞化學定量術

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組織學

組織學緒論
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組織和細胞形態結構及其化學成分的定量研究，是以量的測定及其數據變化闡述組織和細胞的生長、分化、代謝和功能的演變以及對環境因素和致病因素的反應。生命科學的研究不斷深入，定量技術的應用日益廣泛并有所進展。

1、顯微鏡分光亮度定量術此方法是應用顯微分光亮度計（microspectrophotometer）測定組織化學和免疫組織化學染色標本的反應強弱，進行化成分的定量分析的?；驹硎羌毎麅饶撤N物質的含量不同，其染色反應的深淺不一，對一定波長的光吸收也就不同，即某物質的消亮度與一定厚度和面積內的該物質濃度成正比。通過光電組合自動控制系統將消光度轉換為電信號，即可得出光密度值（O、D值），進行定量分析比較。前述熒光素染色、酶和核酸組織化學染色、多肽和蛋白質免疫組化染色、放射自顯影和原位雜交等標本，均可應用顯微分光光度計做定量分析。

2、形態計量術形態計量術（morphometry）是運用數學和統計學原理對組織和細胞進行二維和三維的形態測量研究，如細胞及其微細結構成分的數量、體積、表面積、周長等的相對和絕對值的測量，其中三維立體結構的研究又稱體視學（stereology）。機體組織的光鏡結構計量已有不少有意義的資料，如人和動物的肺泡數量和表面積，腎小體的數量和體積比，肝細胞的體積和數量，胰島的數量及各類細胞的數量比，腺垂體各種內分泌細胞的數量比等。通過組織切片或照片（光鏡和電鏡）平面圖像的測量，推算其立體結構數值，傳統方法是將測試系統（點、線、方格等）投影或覆蓋在切片上或照片上，把若干樣品的平面測量數據按數學公式推算出其立體數值。目前已廣泛應用圖像分析儀（image analyzer）進行形態計量研究，該儀器也是光學、電子學和計算機高技術產品，它是將切片或照片圖像通過攝像機顯示于監示器屏幕上，并根據不同結構的顏色深淺（灰度）及各像點的大小位置，快速準確地得出所需的各種形態數據。組織化學和免疫組織化學染色標本，也可應用圖像分析儀測定其光密度值，進行定量分析。

3、流式細胞術流式細胞術（flow cytometry,FCM）是近年建立的細胞分類和定量研究技術，它是應用流式細胞儀（或稱熒光激活細胞分類器，fluroescent activated cell sorter）對單個細胞生物化學和生物物理特性進行快速定量測定的。工作原理是先分離被檢細胞制成懸液，并作熒光染色或標記，使單細胞液流快速通過該儀器的激光器照射分析區，被檢細胞產生的不同熒光信號轉變為電脈沖，分別輸入計算機內貯存，并顯示于示波器屏幕上，即可獲得該細胞群體中不同類型細胞的有關數據，如不同細胞的數量、熒光強度以及細胞體積、表面積和內部結構等參數；還可使細胞附有不同電荷，分類收集各種細胞，該技術的特點是速度快，精確性高，靈敏度大，已成為一種重要手段廣泛用于細胞動力學、遺傳學、免疫學、腫瘤學等的研究。如細胞DNA，RNA或某種蛋白質的含量分析，單個染色體DNA含量及分選，淋巴細胞膜抗原或受體的分析及細胞亞群分選，雜交細胞等的分選等，也用于腫瘤臨床診斷及療效和預后的分析等。