醫院藥學/藥品衛生檢驗方法通則

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醫院藥學

附錄

通則

一、供試品取樣及注意事項

1．供試品取樣應有一定數量，以使檢驗結果有代表性。因此，正常的供代品，一般每悠批應隨機抽取兩瓶或兩盒以上的包裝單位。檢驗時每次量少應分取兩瓶（盒）以上的樣品共10g或10ml，中藥蜜丸至少應分取4丸以上共10g；貴重或微量包裝的供試品，取樣最可酌減。

2．凡異常的供試品，則選取有疑問的樣品進行檢驗。

肉眼能看出發霉生蟲變質、活螨的樣品，應判為不合格，無需再作抽樣檢驗。

3．檢查活螨的樣品抽樣量，見活螨的檢驗法。

4．供試品在檢驗前，應嚴格保持包裝的原有狀態，不得啟開。防止再污染。并放在陰涼干燥處，防止微生物再繁殖，以免影響檢驗結果。凡已將原包裝啟開，則無代表性，應另行取樣。

5．供試品在檢驗過程中，從開封至全部檢驗操作時結束，須防止微生物再污染和擴散。凡直接與樣品的接觸的用具，均應事先滅菌并保持無菌；全部操作須在無菌室內進行，或在相應的條件下，按無菌操作規定進行。

6．供試品稀釋后，須在1-2小時內操作完畢，防止微生物繁殖或死亡。

7．供試品稀釋成供試劑液后，應在均勻狀態下取樣。凡因抑制菌或不溶于水的劑型，其供試品應作特殊處理后進行檢驗。

8．從供試品檢出大腸桿菌或其他致病菌的報告發出起，該菌促保存一個月備查。如有疑問，可送藥檢部門或上一級檢單位復核。

二、供試品制備

1．凡固體樣品，應稱取10g，加在100ml稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩沖液）中，經充分研磨或振搖制成試液。液體樣品則可量取10ml加在90ml稀釋劑中，混勻后成供試液。

2．凡含有防腐劑或抑或菌成分且影響檢驗的供試品，可經離心沉淀集菌法及其化適宜的方法處理后，檢驗大腸桿菌和其他病菌。集菌處理法如下：

取供試液10ml，以無菌手續放在滅菌尖底刻度離心管中，經每分鐘3500轉以上離心沉淀30分鐘，用滅菌毛細吸管取上清液棄掉，并留管底的2ml殘余液，將基全部洗凈加在培養基中，進行增菌檢驗。含有不溶性藥渣的樣品稀釋液，可均勻吸取10ml放在離心管中，先經每分鐘500轉左右離心沉淀5分鐘，取其上清液放在另一滅菌尖底類刻度離心管中，經每分鐘約3500轉以上離心沉淀30分鐘，輕輕吸取上清液棄掉，取其管底的2ml殘余淮全部洗凈加在培養基中，半菌檢驗即得。

3．非水溶性的軟膏、乳膏、油膏劑等，可稱取樣品5克，放在乳缽或杯中，加8ml滅菌的吐溫-80充分研磨勻后，加入經140℃干熱滅菌半小時的西黃蓍膠2.5g研磨勻。再加少量45℃的稀釋劑充分研磨使成均勻乳劑隨后邊加入稀釋邊研磨使成100ml乳劑移至三我瓶中，即為1：20供試液。

或稱取供試品2.5g，分別量取液體石蠟10ml，吐溫-8010ml，稀釋劑30ml。先將供試品置乳缽中，邊研磨邊滴加液體石蠟；然后再邊研磨邊滴咖吐溫-80，研磨均勻后，再邊加入稀釋劑邊研磨，開始每次約1ml，待起團塊后，加入稀釋劑3ml，稍停一分鐘，再輕輕研磨至乳化，將稀釋加完止。即得1：20供試液。

4．濾膜法：取規定量的供量的供試品，按1ml加入滅菌生理鹽水50ml左右，搖勻，用滅菌吸管或注射器注入薄膜過濾器內，減壓抽干后，用滅菌生理鹽水或其他適宜的溶劑沖洗薄膜3次，每次ml。取出蒲膜，剪成幾條，加至10ml滅菌稀釋劑中，充分搖動，使成供試液。可供細菌、酵母菌和霉菌計數用。或將成幾條的上述蒲膜有加至有關的增菌培養基中培養，或供檢查綠膿桿菌或金黃色葡萄球菌用。

三、陽性菌株對照試驗

1．為便于研究觀察成藥制劑中，某些含有防腐劑和抑制菌成分的干擾作用，以及測試常規檢驗方法和培養基、試劑等的靈敏度時，可將定量的已知陽性對照菌加在供試品稀釋液中，按檢驗供試品的操作方法進行陽性菌的對照試驗，陽性對照菌應生長。

2．常用的陽性對照菌株，衛生部檢定所編號：大桿菌44102、沙門氏菌50094、綠膿桿菌10104、金黃色葡萄球菌26003和破傷風桿菌64067等。

3．對照試驗加入的已知活菌量，每批試品應控制在50-100個范圍之內，需氧菌常用的計數方法，如金黃色葡萄球可用37℃培養18-20小時新鮮肉湯培養物，十倍遞增稀釋至10^-6，取其0.1ml按瓊脂平板表面涂抹法或取10^-7稀釋液1ml按澆碟法進行活菌數測定。按每ml菌菌液內所含的活菌量，取適量加在供試品量對照檢驗即得。破傷風桿菌的陽性對照以作毒力試驗為主（具體操作見破傷風桿菌檢驗項目）。

4．作陽性株對照試驗時，注意安全，嚴格防止污染供試品和環境。為此，加入陽性菌的操作可另外無適宜的地方進行。

檢驗方法

一、細菌總數測定法

細菌總數的測定，是考察供試品每g或每ml內所污染的活菌數量。測定結果便于判明供試品被細菌染的程度，以及生產單位所在用的藥品原料、工具設備和工藝流程、操作者的衛生狀況，是對供試品進行衛生學總評價的綜合依據。

二、酶菌總數測定法

霉菌總數（包括酵母菌）的測定，是考察供試品每g或每ml內所污染活的酵母菌、霉菌數量，供以判明供試品酵母菌。霉菌污染程度及其一般生物狀況。

三、大腸桿菌檢驗法

大腸桿菌來源于人和溫血動物的糞便。凡由供試品中檢出大腸桿菌時，表明該藥品已被糞便污染，患者服用后，有被糞便中可能存的其它腸道病菌和寄生蟲卵等病源體感染的危險。因此，大腸桿菌被列為重要的省沙門氏菌，是非規定滅菌口服藥品的常規必檢項目之一。

四、沙法氏菌檢驗法

主要寄生在人體，哺乳動物和家禽的腸道內，可隨同糞便的排泄污染水源、食品與藥品。沙門氏菌的種類繁多，有些對人有致病力，如傷寒沙門氏和副傷寒沙門氏菌；有些對動物有致病力，如鴨沙門氏菌和雛沙門氏菌；尚有一些對人和動物皆有致病力，如腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌等，它們能引起人類傷寒癥、急性胃腸炎和敗血癥等。

帶有這些細菌的人與動物常可直接或間接地污染藥品的生產環境、工具設備和原料、輔料，以及半成品和成品。特別是用動物臟器制成藥品，污染機率較高，影響患者用藥安全，并有可能通過藥品的流通而傳播，故將沙門氏菌，應列為藥品的必檢項目。

五、綠膿桿菌檢驗法

假單胞菌屬的綠膿桿菌對人類有致病力，同藥品衛生有關。特別在大面積的燒傷，燙全國各患者，眼科疾病和其他外傷方面，常因感染綠膿桿菌后病情加重，造成患者傷處化膿，并可引起菌血癥等，眼角膜潰瘍甚至失明，損害病人健康。因此一般眼科制劑和外傷用藥，規定不得檢出綠膿桿菌。

六、金黃色葡萄球檢驗法

金黃色葡萄球在自然界分布較廣，常可污染藥品及食品，是葡萄狀球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可致敗血癥。某些溶血性菌株尚可產生耐熱性的腸毒素，加熱到100℃、30分鐘毒素不致破壞，有時細菌已被殺死，毒素仍然存在，以致引起急性胃腸炎，是人類食物中毒癥的常見病因之一。因此，目前規定凡外用藥品、眼科制劑不得檢出金黃色葡萄球菌。

七、破傷風桿菌檢驗法

破傷風菌屬于專性厭氧梭狀芽孢桿菌屬，廣泛分布于泥土上層吸入人和牲畜的糞便中，以根，莖類植物為原料的藥品。常可受到污染。本菌為專性厭氧菌、菌體細長，周身有鞭毛，能運動。成熟的芽孢的菌體似鼓槌狀，是破傷風桿菌的形態特征。本菌為革蘭氏染色陽性，但培養較久后常為革蘭氏染色陰性。其繁殖體的抵抗力同其它無芽孢菌相似，而芽孢則有高度抵抗力，經溫熱100℃；干熱150℃一小時尚參存活，在塵埃或土壤中可數年不死。

破傷風病主要由破傷風桿菌的外毒素棗神經毒素引起的，這種毒素有選擇性地作用于神經系統，特別是能引起脊髓前角細胞中，從面發生伸肌痙攣性收縮，呈角弓反張強直狀態是破傷風特有的抽搐癥狀。因此，用于湥部組織、創傷和潰瘍面的外用制劑不得檢出破傷風桿菌。

八、活螨檢驗法

螨，屬于節肢動物門，蜘蛛綱，蜱螨目，種類繁多，分布甚廣。其生活習性各異營自由生活或寄生生活。在土壤、池沼和江河湖海里，動植物體上，貯藏食品和藥品中，都有它們的存在。體形微小、多在一毫米以下，一般呈圓形或卵圓形，頭胸腹分界不明顯。幼螨足三對，成螨足多數為四對，足由六節組成。口器向前端突出，螯肢常呈螯鉗狀，有齒。須肢節數因種類而異由一~二節到五節組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端背面或兩側有一~二對眼。呼吸通過氣管或體壁進行。軀體兩側對稱，表面被有堅硬的幾丁質的板，保護其內部器官和支持肌肉固定。體表剛毛、它的形狀、數目及彼此間長短比例和排列位置因種類而異，在分類上有重要意義。

螨可蛀蝕損壞藥品，使藥品變質失效，并可直接危害人體健康或傳播疾病，例如，中成藥中發現的腐食酪螨，對人具有致病力。一種是引起皮炎，另一種是引起消化系統、泌尿系統呼吸系統的疾病。因此，用于口服、創傷、粘膜和腔道的藥品，不得檢出活螨。

供試品取樣量：每批取兩瓶或兩盒以上的包裝單位；貴重或微量包裝的供試品，取樣量可酌減。